淋球菌實驗室檢查包括涂片,培養(yǎng)檢查淋球菌、抗原檢測,藥敏試驗及PPNG測定,基因診斷。
(一)涂片檢查:
取患者尿道分泌物或?qū)m頸分泌物,作革蘭氏染色,在多形核白細胞內(nèi)找到革蘭氏陰性雙球菌。涂片對有大量膿性分泌物的單純淋菌性前尿道炎患者,此法陽性率在90%左右,可以初步診斷。女性宮頸分泌物中雜菌多,敏感性和特異性較差,陽性率僅為50-60%,且有假陽性,因此世界衛(wèi)生組織推薦用培養(yǎng)法檢查女病人。慢性淋病由于分泌物中淋球菌較少,陽性率低,因此要取前列腺按摩液,以提高檢出率。
咽部涂片發(fā)現(xiàn)革蘭氏陰性雙球菌不能診斷淋病,因為其他奈瑟菌屬在咽部是正常的菌群。另外對癥狀不典型的涂片陽性應作進一步檢查。
。ǘ┡囵B(yǎng)檢查:
淋球菌培養(yǎng)是診斷的重要佐證,培養(yǎng)法對癥狀很輕或無癥狀的男性、女性病人都是較敏感的方法,只要培養(yǎng)陽性就可確診,在基因診斷問世以前,培養(yǎng)是世界衛(wèi)生組織推薦的篩選淋病的唯一方法。
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1.固相酶免疫試驗(EIA):可用來檢測臨床標本中的淋球菌抗原,在流行率很高的地區(qū)而又不能作培養(yǎng)或標本需長時間遠送時使用,可以在婦女人群中用來診斷淋球菌感染。
2.直接免疫熒光試驗:通過檢測淋球菌外膜蛋白I的單克隆抗體作直接免
疫熒光試驗。但目前在男女二性標本的敏感不高,特異性差,加之實驗人員的判斷水平,故該實驗尚不能推薦用來診斷淋球菌感染。
(四)基因診斷
1.淋球菌的基因探針診斷
淋球菌的基因探針診斷,所用的探針有:質(zhì)粒DNA探針,染色體基因探針和rRNA基因探針。
2、淋球菌的基因擴增檢測
上面講述的探針技術檢測淋球菌的方法,雖然比培養(yǎng)方法在靈敏度,特異性和方便性上有了很大的提高,但其仍有一定的局限性,如多數(shù)情況下需要標本的淋球菌濃度很高,PCR技術和連接酶鏈反應的出現(xiàn)進一步提高了檢測淋球菌的靈敏性,它具有快速、靈敏、特異、簡便的優(yōu)點,可以直接檢測臨床標本中極微量的病原體。
3. 臨床基因診斷淋球菌的注意事項
目前臨床檢測淋球菌的基因診斷方法主要采用PCR方法,但是該方法在臨床檢測中應注意幾個問題。
。1)引物設計 除了以上所列的淋球菌PCR引物外,還可從在其它基因上設計,但是引物序列應具有特異性。因為細菌的染色體較大,許多基因序列并沒有搞清楚;同時細菌之間或近或遠有一定的同源性,而且細菌所含質(zhì)粒序列間也存在同源性,因此設計引物一定要進行基因數(shù)據(jù)庫比較分析,同時進行特異性和靈敏性實驗,從中選擇引物進行臨床檢測。
。2)臨床標本處理 對臨床標本來講,PCR模板要求越純越好。這就要求在采集標本時要取到準確的位置,對于無癥狀患者要適當多采樣,以保證采集到病原體細菌。另外由于臨床標本成分比較復雜,有時簡單處理的標本PCR擴增效果并不理想,這可能是由于雜質(zhì)過多造成的,需要進一步純化,如用酚一氯仿抽提法純化,結(jié)果將會好轉(zhuǎn)。這種純化方法比較麻煩,目前已有商品化的DNA純化試劑盒,可以較簡便地從臨床標本中提取高純度的DNA。
(3)PCR產(chǎn)物的檢測方法 不久以前臨床PCR檢測淋球菌幾乎都采用電泳的方法進行PCR產(chǎn)物的鑒定。該方法存在許多問題,如由于肉眼觀察的主觀性而造成假陽性和假陰性的結(jié)果。目前用雜交顯色法代替電泳法,提高了結(jié)果判斷的特異性和靈敏性。
總之,PCR方法與LCP方法比傳統(tǒng)的培養(yǎng)法在靈敏性和特異性上有了很大的提高,時間也大大縮短。隨著基因診斷技術的不斷改進。PCR方法與LCP方法在淋球菌的檢測將會成為常規(guī)的檢測方法。
。ㄎ澹┧幟粼囼灒涸谂囵B(yǎng)陽性后進一步作藥敏試驗。用紙片擴散法做敏感試驗,或用瓊脂平皿稀釋法測定最小抑菌濃度(MIC),用以指導選用抗生素。
。㏄PNG檢測:β-內(nèi)酰胺酶,用紙片酸度定量法,使用Whatman I號濾紙PP-NG菌株能使其顏色由藍變黃,陽性為PPNG,陰性為N-PPNG。