支原體感染的實驗室診斷主要是支原體的培養(yǎng)和血清學鑒定，目前主要采用基因診斷。
1.支原體培養(yǎng)：
a.采集標本，一般為泌尿生殖試子或刷片，少數取前列腺液，精液、關節(jié)液，或取輸卵管，直腸活檢物，近年來用初段尿標本離心物，以取代尿道拭子。拭子取材時，將拭子插入男性尿道2-4cm，用力擦取。該方法容易造成尿道損傷及繼發(fā)感染。用時須慎重。女性則需先清潔宮頸鱗狀與柱狀上皮結合部，用細胞刷收集宮頸標本，能增加感染細胞的數量，較棉拭子敏感性高。
b.常用培養(yǎng)基為牛心浸液或蛋白胨，并含1%新鮮酵母浸液，10-20%動物血清及0.5%氯化鈉，還可加葡萄糖和精氨酸以促進MH和MG生長，加入尿素以供UU代謝，適量加青霉素抑制雜菌。
2.血清學鑒定法：最常用的是瓊脂擴散法，即將支原體接種到瓊脂皿上。然后再用浸過適量血清的濾紙放到瓊脂表面，觀察哪一種能抑制支原體生長。也可用瓊脂表面的菌落作熒光抗體染色法，用落射熒光顯微鏡觀察，此法的優(yōu)點是可以利用最初生長在瓊脂表面上的菌落而不必將支原體傳代。
血清學診斷試驗：酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)敏感性高：微量免疫熒光法(MIF)具有快速特點。
3.基因診斷：利用DNA探針對支原體診斷其敏感性稍差，但特異性高，用聚合酶鏈反應(PCR)，敏感性、特異性均高。具體檢測方面如下：
(1)標本處理
1.取材部位為子宮頸管，男性為尿道，將滅菌白金耳深入宮頸管或尿道1cm左右，轉動數圈，停留約30s，取出后置標本緩沖液中。
2.解脲脲原體DNA提�。�
將宮頸管內或尿道內刮取物置含0.5%NP-40、0.5%Tween20，1%SDS和2mg/ml蛋白酶K的TES緩沖液(50mmol/L Tris-HCl，50mmol/L NaCl，100mmol/ L EDTA，pH 8.0)，置37℃裂解60 min，沸水5min，酚，氯仿抽提DNA乙醇沉淀，沉淀物溶于20μl TE緩沖液(100mmol/L Tris-HCl，1mmol/L EDTA，pH 8.0)。
(2)引物設計
引物來源于解脲脲原體，脲酶基因序列：
UU1：CAGATACATTAAACGAAGCAGG(1613-1635)
UU2：GTGGTGACATACCATTAAC(1837-1819)
(3)PCR擴增
傳統(tǒng)的方法為的反應體積為100μl，含5x反應緩沖液20μl和FD-DNA聚合酶2μ、4種dNTP各200μmol/L以及引物對各25pmol/L。上述成分預先一次性分裝于0.5ml離心管，-20℃?zhèn)溆�。臨用加模板DNA 2μl，短暫離心，加100μl礦物油覆蓋�，F在試劑已商品化，反應體積為25μl，單管已分裝好，只要加入模板DNA即可。置DNA擴增儀進行40次循環(huán)擴增。每次循環(huán)包括90℃變性45s(第一次循環(huán)變性2min)，55℃退火30s和72℃延伸40s(最后一次循環(huán)72℃，延伸5min)三個步驟。每次擴增均應作陰陽性對照。
(4)擴增產物的檢測
1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測：取10u l PCR擴增物作1.5%瓊脂糖凝膠電泳、0.5μg/ml溴化乙錠染色，以PGEM-3Zf(+)DNA-Hae Ⅲ為分子量標準，置紫外透射儀觀察結果。
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